ELISA 是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗又可以用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。ELISA 的影響因素較多，加強(qiáng)質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點。

一、質(zhì)量控制血清

質(zhì)控血清是已有靶值的血清，在每次的常規(guī)檢驗中加入一份或數(shù)份，通過所得結(jié)果來了解本次檢驗的情況。質(zhì)控血清檢驗的結(jié)果如能控制其誤差在一定范圍內(nèi)，就說明該檢驗沒有發(fā)生不允許的誤差。如果出現(xiàn)超過允許誤差范圍的異常結(jié)果，提示該檢驗不合格，應(yīng)尋找原因，糾正后，重檢待測標(biāo)本。因此質(zhì)控血清在質(zhì)控工作中起重要作用。

1.質(zhì)控血清的使用

衛(wèi)生部臨床檢驗中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清，可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開展某項檢驗的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按3-6個月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清，在一批質(zhì)控血清將用完之前，需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定，較長期內(nèi)效價不變，其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測作用。

2.臨界值質(zhì)控血清

質(zhì)控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質(zhì)控血清定值，一般定在正常值與異常值交界點上，定性測定時處于弱陽性水平，稱為臨界值。乙肝標(biāo)志物臨界值的制定，應(yīng)按臨床要求，為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽性的標(biāo)準(zhǔn)。 臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽性對照品和陰性對照品以外的第三個對照品，它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽性反應(yīng)的標(biāo)本不漏檢。

3.質(zhì)控血清的制備

每個實驗室可以根據(jù)自己的條件，選用臨床中心提供的質(zhì)控血清，或按以下方法自己制備本室使用的質(zhì)控血清（以乙肝質(zhì)控血清為例）。

（1）收集新鮮的無溶血、無黃疸、無細(xì)菌污染的陽性血清。

（2）56℃加熱10小時來活。

（3）離心或過濾除去沉淀。

（4）用10%的小牛血清或正常人血清（PBS緩沖液）將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成份更接近于檢測標(biāo)本。

（5）抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿，封口，20℃保存?zhèn)溆谩２豢煞磸?fù)凍融。被檢物要求檢出的水平常被認(rèn)為是質(zhì)控血清應(yīng)選擇的水平。如果該試驗還有其它要求，則應(yīng)加所要求濃度的質(zhì)控物。

（6）標(biāo)定含量。20-30次測定結(jié)果刪除>±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值，并與已知定值血清對比測定。

二、室內(nèi)質(zhì)量控制程序

臨床檢驗的檢測結(jié)果，每次或每天之間不可能*。決定允許的誤差范圍，以臨床上不造成誤診與漏診為準(zhǔn)，通過以下步驟來確定質(zhì)控范圍。

1.合適條件下的測定誤差

合適條件下已知值質(zhì)控血清變異（optimal conditions variance,簡稱OCV）的測定：在本實驗室合適條件下（包括操作者、試劑、儀器等）檢測質(zhì)控血清20-30次，測得結(jié)果計算，求出該組數(shù)據(jù)的均值和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示該實驗室的合適工作質(zhì)量。

現(xiàn)舉例說明HBsAg ELISA法檢測時OCV的測定。使用的質(zhì)控制血清為臨界血清，HBsAg濃度為5ng/ml。在該實驗室中選擇素質(zhì)、操作zui熟練的技術(shù)員進(jìn)行認(rèn)真地專門測定，選用合適的試劑盒，檢測之前，將恒箱、加樣器等認(rèn)真校正、調(diào)校正、調(diào)試，使用新的加樣吸頭等，即在合適、的條件下進(jìn)行檢測。除質(zhì)控血清外同時測定陰性對照品和陽性對照品。并作雙份測定，得出2個吸光值（A值），求出X。連續(xù)作20次，求出20個X，即X1……X20。從這20個數(shù)據(jù)中，求出OCV的X和SD。

2.已知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差

常規(guī)條件下已知值質(zhì)控血清變異（routine conditions variance-known value,簡稱RCVK）的測定：做常規(guī)檢驗的技術(shù)人員，在常規(guī)檢驗的條件下，將質(zhì)控血清放在常規(guī)檢測樣本中，進(jìn)行20次檢驗，結(jié)果計算同OCV法。一般認(rèn)為RCV的SD在OCV的SD兩倍范圍內(nèi)可以接受。若太大應(yīng)該查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改進(jìn)實驗室條件后（例如較正加樣器，糾正洗板操作，調(diào)正溫育溫度等），重新進(jìn)行RCVK的測定。如果RCVK的SD值更小，說明OCV不是合適條件下測定的，應(yīng)重新再測OCV。常規(guī)條件下，RCVK肯定要比OCV大。通過質(zhì)控控制各項條件，使RCVK的數(shù)據(jù)盡可能接近OCV值。RCVK的數(shù)據(jù)反映該實驗室日常工作的質(zhì)量，用于作質(zhì)控圖，對室內(nèi)檢驗的結(jié)果進(jìn)行控制，每日檢驗的結(jié)果，報告能否發(fā)出。

3.未知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差

常規(guī)條件下,未知值質(zhì)控血清變異(routine conditions variancl-unknown value 簡稱RCVU)的測定：有時為了避免主觀性,再作RCVU測定。測定步驟同RCVK，但檢測的操作者不知質(zhì)控血清的定值，或在操作者不知哪份是質(zhì)控血汪清的條件下進(jìn)行常規(guī)檢驗，以排除操作者的主觀性。在此不再舉例說明。

4.臨床應(yīng)用的要求

對任何一個試驗都應(yīng)確定一個允許的誤差范圍，前題是滿足臨床要求。如允許誤差定得過小，在臨床上不存在任何意義，但為了符合該規(guī)定卻要花費很大人力、物力和時間。相反，如果將允許誤差定得過大，將使監(jiān)測系統(tǒng)察覺不到臨床上要求檢出的誤差，失去質(zhì)控的意義。
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